Définitions :
Lysozyme: enzyme présente dans les larmes et la salive. Elle hydrolyse les liaisons osidiques entre les NAM
(N-acétyl muramique) et les NAG (N-acétyl glucosamine) du peptidoglycane et entraine donc une
dépolymérisation de celui-ci.
Milieu hypotonique: En biologie, un environnement cellulaire hypotonique est un environnement ayant une
concentration inférieure en solutés au cytoplasme. Dans un environnement hypotonique, l'osmose incite
l'eau à entrer dans la cellule.
Milieu hypertonique: En biologie, un environnement cellulaire hypertonique est un environnement ayant
une concentration supérieure en solutés à celle du cytoplasme. Dans un environnement hypertonique,
l'osmose incite l'eau à quitter la cellule.
Osmose : phénomène de diffusion de la matière mis en évidence lorsque des molécules de solvant
traversent une membrane semi-perméable séparant deux solutions dont les concentrations en soluté sont
différentes; le transfert de solvant se fait alors de la solution la moins concentrée (milieu hypotonique) vers
la solution la plus concentrée (milieu hypertonique) jusqu'à l'équilibre (milieux isotoniques).
Expérience 1:
On met en culture Bacillus (bactérie Gram positif) en bouillon nutritif. Ce milieu possède une pression osmotique
inférieure à celle du cytoplasme des bactéries (= milieu hypotonique).
Quelques heures après, on sépare les milieux dans 2 tubes et on teste 2 conditions: dans un tube on ajoute du
lysozyme (Tube 2) mais pas dans l'autre tube (Tube 1). On examine ensuite les 2 tubes:
• Tube 1: L'examen macroscopique est inchangé et l'examen microscopique montre des bactéries gonflées.
• Tube 2: à l'examen macroscopique, on observe un tube moins trouble qu'avant ajout de lysozyme et l'examen
microscopique ne montre aucune forme bactérienne.
1) Faire un organigramme de l'expérience et indiquer les résultats obtenus.
2) Expliquer l'intérêt de l'expérience sans ajout de lysozyme?
3)
Expliquer pourquoi les bactéries du tube 1 sont gonflées?
4) Expliquer la disparition du trouble dans le tube 2?
5) D'après cette expérience, quel rôle peut-on donner à la paroi bactérienne?
Expérience 2:
On met en culture Bacillus dans un bouillon hypersaccharosé. Le milieu a une pression osmotique supérieure à celle
du cytoplasme bactérien (= milieu hypertonique).
- Examen macroscopique du tube : Après addition de lysozyme, le trouble ne disparait pas.
- Examen microscopique : les bacilles sont transformés en formes bactériennes parfaitement sphériques : les
protoplastes colorables en rose après coloration de Gram.
6) Qu'entraine un milieu hypertonique sur les bactéries?
7) Expliquer la forme du protoplaste (forme ronde).
8) D'après cette expérience, donner un autre rôle de la paroi.
9) Expliquer la couleur rose obtenue au Gram.
Expérience 3:
Après addition de lysozyme à une culture d'E.coli (bactérie gram négatif) en bouillon hypersaccharosé, le trouble ne
disparait pas et au microscope, on observe des formes bactériennes plus ou moins sphériques : les sphéroplastes.
Expliquer la formation des sphéroplastes et préciser pourquoi leur forme n'est pas parfaitement sphérique.